夜行性，尤其是清晨和黄昏活动频繁，有时也在白天活动。相机捕获和直接观察表明该物种主要是昼夜活动，尽管它已被相机捕获并发现在夜间更加活跃。通常单独行动。善于奔走，能贴伏地面前进、钻越缝隙和洞穴，也能游泳、攀树和墙壁等。除繁殖期外，一般没有固定的巢穴。通常隐藏在柴草堆下、乱石堆、墙洞等处。嗅觉十分灵敏，但视觉较差。性情凶猛，常捕杀超过其食量的猎物。

黄鼬冬季常追随鼠类迁移而潜入村落附近，在石穴和树洞中筑窝。它们擅长攀援登高和下水游泳，也能高蹦低窜，在干沟的乱石堆里闪电般的追袭猎食对象。黄鼬的警觉性很高，时刻保持着高度戒备状态，要想对黄鼬出其不意的偷袭是很困难的。一旦遭到狗或人的追击，在没有退路和无法逃脱时，黄鼬就会凶猛地对进犯者发起殊死的反攻，显得无畏而又十分凶猛。黄鼬及其家族的其他成员还有一种退敌的武器，那就是位于肛门两旁的一对黄豆形的臭腺，它们在奔逃的同时，能从臭腺中迸射出一股臭不可忍的分泌物。假如追敌被这种分泌物射中头部的话，就会引起中毒，轻者感到头晕目眩，恶心呕吐，严重的还会倒地昏迷不醒。

黄鼬食性很杂，主要以小型哺乳动物为食。在野外以老鼠和野兔为主食，例如田鼠、松鼠、小鼠和野兔，尽管野兔在短距离内跑得很快，但在长时间的高速追逐下，最后总会由于恐惧和力竭而被赶上咬断脖颈，做了黄鼬口下的牺牲品。也吃两栖动物、鱼类、鸟卵、昆虫和腐肉，并且在季节性供应时以松子为食。在住家附近，常在夜间偷袭家禽，首先吸食其血液，再吃内脏及躯体，性嗜吸血。以臭腺放出臭气自卫。据调查，每头黄鼬一夜之间可以捕食6-7只老鼠。